本研究针对传统考马斯亮蓝法在痕量蛋白质检测中灵敏度不足、稳定性差的问题，根据该方法的原理对其各个环节进行优化。首先，采用酶标仪结合96孔板替代传统分光光度计和比色皿，提高了检测通量与精度。其次，以20 mmol·L-1 PB替代水作为稀释液，增强了蛋白质溶出度。然后，考马斯亮蓝G-250溶液最佳配方为：5 mg考马斯亮蓝G-250溶于含5%的95%乙醇和13%的85%磷酸的水溶液中。最佳体系为等体积牛血清白蛋白与考马斯亮蓝G-250溶液反应，最优反应条件为避光10 min。最后，验证结果显示：蛋白质浓度在0?21 mg·L-1范围内线性关系良好（线性相关系数R2>0.99），检测限低至1 μg·mL-1，准确度（80?115%）和精密度（RSD<4%）均在药典参考值限度之内。本研究成功实现了痕量蛋白质的精准定量分析，且具有低成本、快速、高通量的特点，为蛋白质相关研究提供了更为精准、高效的技术支持。