基于ARMS-PCR技术检测SLC39A13 基因核苷酸多态性方法的建立
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1.河北科技大学食品与生物学院;2.东北林业大学林学院;3.太原金域临床检验所有限公司

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Q78

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国家支撑计划项目(2015BAD15B0501);中央引导地方科技发展资金项目(226Z7722G)


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    为解决生育率下降问题,针对SLC39A13基因rs755555 位点 ,建立基于荧光定量PCR的分子诊断技术,实现其核苷酸多态性 (SNP )精准分型;采用多重ARMS-PCR技术方法,以提高检测灵敏性、特异性及准确性为目标,首先分别设计rs755555位点及内参基因PPIA的检测引物和探针;其次构建阳性对照质粒;最后以基因分型精确度和稳定性为指标,优化引物探针组合,优化检测试剂的 PCR 反应体系和反应条件。野生型最优引物探针组合为:WF1、R1、FP1、PIRF5、PIRR5、PIRP5;突变型最优引物探针组合为:FMF3、R1、FP1、PIRF5、PIRR5、PIRP5。每个 检测样品的最优反应体系:SLC39A13基因上下游引物探针各0.1μl,内标上下游引物探针各0.1μl,10μl全式金酶,5.4μl纯水,4μl样品基因组。采用ARMS-PCR技术实现了SLC39A13 基因 rs755555 位点 SNP 的精准分型,为研发 SLC39A13 基因rs755555 位点多态性检测试剂盒提供技术基础,对提高锌的临床治疗价值、实现患者个体化治疗具有重要意义。

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  • 收稿日期:2024-03-18
  • 最后修改日期:2024-06-29
  • 录用日期:2025-02-21
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